GB/T 25223-2024 动植物油脂 甾醇组成和甾醇总量的测定

范围

本文件界定了动植物油脂中甾醇组成和甾醇总量的术语和定义,描述了采用气相色谱法测定动植物油脂中甾醇组成和甾醇总量的原理、试剂、仪器设备、操作步骤、结果表示和精密度。

本文件适用于动植物油脂中甾醇组成和留醇总量的测定。其中,第二法仅适用于橄榄油和油橄榄果渣油中甾醇组成和甾醇总量的测定。

第一法动植物油脂(非橄榄油和橄榄果渣油脂)中甾醇组成和甾醇总量的测定

原理

样品用氢氧化钾-乙醇溶液回流皂化后,不化物以氧化铝层析柱进行固相萃取分离。脂肪酸阴离子被氧化铝层析柱吸附,甾醇流出层析柱。通过薄层色谱法将留醇与不皂化物分离。以胆留烷醇或桦木醇为内标物,通过气相色谱法对甾醇组分及其含量进行定性和定量分析。

1.试剂

1、0.5mol/L氢氧化钾-乙醇溶液:溶解3g氢氧化钾于5ml水中,再用100mL乙醇(4.2.3)稀释溶液应呈无色或淡黄色。

2、胆甾烷醇(5a-胆甾烷-3β-醇)或桦木醇内标溶液:1.0mg/ml 的乙醇溶液。

3、乙醇:纯度不低于95%(体积分数)。

4、氧化铝:中性,粒径0.063mm∽0.200mm,I级活性(含水量为0%)。

5、乙醚:新蒸馏,无过氧化物和残留物。

6、硅胶薄层色谱(TLC)板:大小规格:20cmX20cm,薄层厚度:0.25 mm。

7、薄层色谱用标准溶液:1.0mg/ml胆甾醇丙酮溶液,5.0mg/ml桦木醇丙酮溶液。

8、显色剂:甲醇。

9、硅烷化试剂:在1mLN-甲基-N-三甲基硅烷七氣丁酰胺(MSHFBA)中加入50uL的1-甲基咪唑。

10、水:应符合GB/T6682规定的三级水要求。

 第二法 橄榄油和油橄榄果渣油中甾醇组成和甾醇总量的测定气相色谱法 

原理

样品用氢氧化钾-乙醇溶液回流皂化后,用乙醚提取不皂化物,采用薄层色谱法从不皂化物分离出甾醇。以胆甾烷醇为内标物,通过气相色谱法对甾醇组分及其含量进行定性和定量分析。

1.试剂

1、2mol/L氢氧化钾-乙醇溶液:溶解130g氢氧化钾于200mL水中,放冷后,再用乙醇(4.2.3)稀释至1L,将溶液盛放在具塞的棕色玻璃瓶中,最多储存2d。

2、0.2mol/L氢氧化钾-乙醇溶液:溶解13g氢氧化钾于20mL水中,放冷后,再用乙醇(4.2.3)稀释至 1L。

3、无水硫酸钠。

4、硅胶薄层色谱(TLC)板:可购买,大小规格:20cmx20cm,薄层厚度:0.25 mm,无荧光指示剂。

5、丙酮:色谱纯。

6、正已烷:色谱纯。

7、96%乙醇,最小体积分数p=95%。

8、乙酸乙酯。

9、薄层色谱用参比标准溶液:5%胆固醇或植物甾醇混合物的乙酸乙酯(5.2.8)溶液。

10、质量浓度为0.2g/100mL,的2,7二氯荧光黄乙醇溶液:通过加入几滴2mol/L,氢氧化钾-乙醇溶液(5.2.1),使其呈弱碱性。最多储存1年。

11、a-胆甾烷醇内标溶液:质量浓度为0.2g/100ml的乙酸乙酯溶液(5.2.8)。

12、酚酞溶液:质量浓度为10g/L乙醇溶液(4.2.3)。

13、气相色谱法载气:氦气或氢气。

14、气相色谱法的辅助气体:氢气、氦气、氮气和空气。

15、展开剂:V(正己烷):V(乙醚)=65 mL:35 mL。

16、六甲基二硅氮烷。

17、三甲基氯硅烷。

18、硅烷化试剂:吡啶:六甲基二硅氮烷:三甲基氣硅烷=9:3:1(体积比),现配现用。也可以选择。

19、水:应符合GB/T6682规定的三级水要求。